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雙縮脲法蛋白含量測定系列試劑盒（分光光度法 50T/48S）
| 貨號 | SH0623 | 售價（元） | 84 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0623 |
雙縮脲法蛋白含量測定系列試劑盒（分光光度法 50T/48S） |
50T/48S |
測定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測定原理：
強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動物材料
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0623-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
50ml |
4℃ |
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標(biāo)準(zhǔn)品：液體 |
1ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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標(biāo)準(zhǔn)品：液體1ml×1瓶，5 mg/ml，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
測定步驟：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl蒸餾水，1000μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl標(biāo)準(zhǔn)液，1000μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540 nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl待測液，1000μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A測定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式
C待測（mg/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
=5×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
注意事項：
1.樣品蛋白濃度須在1~10mg/ml范圍內(nèi)，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應(yīng)稀釋。因此測定前用1~2個樣做預(yù)實驗，確保蛋白濃度在1~10mg/ml范圍內(nèi)。
2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。