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脫氫抗環(huán)血酸還原酶（DHAR）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0562 | 售價(jià)（元） | 1500 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0562 |
脫氫抗環(huán)血酸還原酶（DHAR）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
DHAR存在于細(xì)胞質(zhì)、線粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsA和GSSG，調(diào)控細(xì)胞AsA/DHA比值，是抗壞血酸-谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶。提高植物體內(nèi)的 DHAR 活性，可提高植物食品中AsA含量，進(jìn)而提高植物食品的營養(yǎng)品質(zhì)。
測(cè)定原理：
DHAR催化GSH還原DHA生成AsA，通過測(cè)定DHA減少速率，計(jì)算DHAR活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0562-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
17.5ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入2.5 ml蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.5 ml蒸餾水充分溶解。
自備儀器和用品：
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；8000g 4℃離心20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
DHAR測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到265nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μl試劑三、20μl試劑四和140μl 試劑二，最后加20μl上清液迅速混勻后于265nm比色，記錄30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A2-A1。
DHAR活性計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
= 92×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 92×△A ÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反總×109÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
= 92×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫升樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/ml) = △A÷ε÷d×V反總×109÷V樣÷T
= 92×△A
ε ：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol /cm；106：摩爾分子換算成微摩爾分子；d：比色杯光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4 L；V樣：反應(yīng)體系中加入上清液體積，20μl =0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；W ：樣品質(zhì)量；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
= 184×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 184×△A ÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反總×109÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
= 184×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫升樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
DHAR(nmol/min/ml) = △A÷ε÷d×V反總×109÷V樣÷T
= 184×△A
ε ：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol /cm；106：摩爾分子換算成微摩爾分子；d：96孔板光徑，0.5 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4 L；V樣：反應(yīng)體系中加入上清液體積，20μl =0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；W ：樣品質(zhì)量；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min。
注意事項(xiàng)：
臨用前配制的試劑未使用完的4℃保存，3天內(nèi)使用完。