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磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0524 | 售價(jià)（元） | 3120 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0524 |
磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
植物葉綠體中磷酸丙糖異構(gòu)酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮之間的轉(zhuǎn)化，磷酸二羥丙酮能快速透過葉綠體的包膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，并在其中逐步轉(zhuǎn)化為蔗糖。
測(cè)定原理：
磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH，340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0524-100T/96S |
Storage |
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提取液一：液體 |
100ml |
4℃ |
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提取液二：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
12ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、震蕩儀、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
酶液提取
①總TPI酶提?。?/span>建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體TPI酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿TPI酶活性，取沉淀加1ml提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中TPI酶活性。
建議測(cè)定總TPI酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的TPI，則按照步驟②提取粗酶液。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入120μl試劑一，20μl試劑二，20μl試劑三，20μl試劑四，20μl粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A2-A1
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
TPI（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
TPI（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
TPI（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
TPI（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T= 643.08×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g