1,5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0520 | 售價（元） | 6240 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0520 |
1,5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
二磷酸核酮糖羧化酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一個關鍵酶，既控制著CO2的固定，同時又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。
測定原理：
在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子的CO2結合，產生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產生甘油醛-3-磷酸，并使還原型輔酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的變化可計算還原型輔酶I氧化速率，還原型輔酶I氧化速率可反應Rubisco的活性。
組成：
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產品名稱 |
SH0520-100T/96S |
Storage |
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提取液一：液體 |
100ml |
4℃ |
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提取液二：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
25ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10ml試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10ml試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入1 ml試劑一，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（注意：試劑二、三、四溶解后，按需分裝-20℃保存。）
自備儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液制備：
①總Rubisco酶提?。?/span>建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體Rubisco酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿Rubisco酶活性，取沉淀加1ml提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中Rubisco酶活性。
建議測定總Rubisco酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的Rubisco，則按照步驟②提取粗酶液。
（注意：粗酶液制備過程中超聲破碎操作使用細胞破碎儀進行。）
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定
(1)工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三1：1混合，用多少配多少；
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10uL樣本、10uL試劑四和180uL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時吸光值A1和5min20s時的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
Rubisco活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：25℃中1 mg蛋白1 min氧化1 nmol NADH。
Rubisco（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T =643×ΔA÷Cpr
此法需要測定粗酶液中蛋白質濃度，建議選購本公司生產的BCA蛋白質濃度測定試劑盒。
2、按樣本鮮重計算
單位的定義：25℃中1 g組織1 min氧化1nmol NADH。
Rubisco（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
上述計算公式中各符合含義：
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5min；W：樣本質量，g。
b.使用96孔板測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：25℃中1 mg蛋白1 min氧化1 nmol NADH。
Rubisco（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T =1286×ΔA÷Cpr
此法需要測定粗酶液中蛋白質濃度，建議選購本公司生產的BCA蛋白質濃度測定試劑盒。
2、按樣本鮮重計算
單位的定義：25℃中1 g組織1 min氧化1nmol NADH。
Rubisco（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W
上述計算公式中各符合含義：
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；W：樣本質量，g。