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植酸酶（phytase）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S)
| 貨號(hào) | SH0433 | 售價(jià)（元） | 672 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0433 |
植酸酶（phytase）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S) |
50管/24樣 |
測(cè)定意義：
植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對(duì)環(huán)境的污染，改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理：
植酸酶在一定溫度和pH值條件下，水解底物植酸鈉生成無機(jī)磷與肌醇衍生物，無機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物，在700nm處有特征吸收峰，根據(jù)700nm處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0433-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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緩沖液：堿性提取液 |
25ml |
4℃ |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
25ml |
4℃ |
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顯色劑：粉劑 |
6瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加緩沖液10ml配制，現(xiàn)用現(xiàn)配；用不完的試劑4℃保存一個(gè)月。
顯色劑：粉劑×6瓶，4℃保存，臨用前根據(jù)用量每瓶加1ml雙蒸水溶解，再加4ml試劑二混勻。
需自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，超聲溶解器，回旋式振蕩器。
樣本處理：
1. 酶制劑：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：500~1000的比例（建議稱取約0.001g，加入1ml提取液）加入提取液，在超聲波溶解器上溶解15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，待測(cè)。
2. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測(cè)。
3. 飼料樣品：飼料烘干粉碎，過40目篩，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測(cè)。
4. 培養(yǎng)液等液體樣品，混勻直接測(cè)定。
測(cè)定步驟：
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試劑名稱(μl) |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本（μl） |
100 |
100 |
37℃溫育5min
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緩沖液（μl） |
400 |
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試劑一（μl） |
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400 |
混勻，37℃溫育30min，95℃，10min終止反應(yīng)，冷卻至室溫
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顯色劑（μl） |
500 |
500 |
混勻，37℃靜置15min，10000g，室溫，離心5min，取上清，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定700nm處吸光值，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
注意事項(xiàng)
1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制，每一瓶是10個(gè)樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期，應(yīng)放棄使用。
2、ΔA線性范圍為0.01-2。
酶活性計(jì)算公式：
（一）NADP+含量的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2764x + 0.0082，R2 = 0.9998；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y為吸光值。
按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在37℃，pH5.5的條件下，每毫克蛋白每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷Cpr2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在37℃，pH5.5的條件下，每克樣本每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/min /g 鮮重）=（△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷W
3. 培養(yǎng)液等液體樣品
酶活性定義：在37℃，pH5.5的條件下，每毫升液體每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/min /ml）=（△A-0.0082）÷0.2764÷T =0.1206×（△A-0.0082）
Cpr：樣本蛋白含量，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。