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β-淀粉酶（β--AL）檢測試劑盒 (分光光度50T/24S)
| 貨號 | SH0283 | 售價（元） | 576 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0283 |
β-淀粉酶（β--AL）檢測試劑盒 (分光光度50T/24S) |
50T/24S |
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
淀粉酶負責水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
測定原理：
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性，鈍化其中之一，就可測出另一種淀粉酶的活力。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0283-50T/24S |
Storage |
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試劑一：液體 |
50ml |
RT |
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試劑二：液體 |
40ml |
4℃ |
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說明書 |
1份 |
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試劑一：50ml×1瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需90℃加熱溶解后再用；
試劑二：40ml×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需70℃加熱后再用。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、離心機、可調式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
粗酶液制備：
組織：稱取0.1~0.2g樣本（建議稱取約0.1g樣本），加入1ml蒸餾水，研磨勻漿；將勻漿倒入離心管中，提取液在室溫下放置提取15min，每5min振蕩1次，使其充分提?。?/span>3000g，25℃離心10min，取上清液加蒸餾水定容至10 ml，搖勻，即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1ml，加入4ml蒸餾水，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于（α＋β）淀粉酶總活力的測定。
血清（漿）等液體樣本：（1）直接檢測α-淀粉酶。（2）吸取淀粉酶原液1ml，加入4ml蒸餾水，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于（α＋β）淀粉酶總活力的測定。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調零。
2、試劑一和試劑二40℃預熱10min。
3、測定操作表：
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試劑名稱（μl） |
α 淀粉酶活力測定 |
總淀粉酶活力測定 |
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對照管 |
測定管 |
對照管 |
測定管 |
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淀粉酶原液 |
250 |
250 |
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70℃水浴15min左右，冷卻
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淀粉酶稀釋液 |
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250 |
250 |
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蒸餾水 |
250 |
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250 |
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試劑二 |
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250 |
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250 |
在40℃恒溫水浴中準確保溫5min
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試劑一 |
500 |
500 |
500 |
500 |
混勻，95℃水浴5min，冷卻，在540nm下測定吸光度，從左到右分別記為A1、A2、A3和A4。
酶活性計算：
1、標準條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x為標準品濃度（mg/ml），y為吸光值。
2、α 淀粉酶活性
（1）按照樣本質量計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白質含量計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T
=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（漿）等液體樣本中α 淀粉酶活性計算
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/ml)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)
3、總淀粉酶活性計算
（1）按照樣品質量計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min//g鮮重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白質含量計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T
=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（漿）等液體樣本中總淀粉酶活性計算
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
總淀粉酶活性(mg/min/ml) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T
=0.5375×(A4-A3＋0.1778)
4、β-淀粉酶活性計算
（1）按照樣本質量計算
單位定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[5.375×(A4-A3＋0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W
（2）按照蛋白質含量計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
β-淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr
（3）血清（漿）等液體樣本中β-淀粉酶活性計算
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
β-淀粉酶活性（mg/min/ml）=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)
5：總淀粉酶稀釋倍數(shù)；V反總：反應體系總體積，0.5ml；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.25 ml；V樣總：提取液總體積，10 ml； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，5min。