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甲基檸檬酸合酶（MCS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0244 | 售價（元） | 4800 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0244 |
甲基檸檬酸合酶（MCS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
MCS廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質(zhì)中，與檸檬酸合酶（CS）共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。
測定原理：
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰輔酶A，進一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸；該反應促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0244-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
1.5ml |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
30ml |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑六：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入1ml蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存；
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
① 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿600g，4℃離心5min。
③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④ 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的CS（此步可選做）。
⑤ 在步驟④的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體CS測定。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）在試劑五中加入1ml無水乙醇和22ml試劑四，混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、220μl試劑五和10μl試劑六，混勻，記錄412nm處20秒時的初始吸光度A1和2分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
MCS活性計算：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
MCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=880×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
MCS（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=177.8×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
MCS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.3556×ΔA
V反總：反應體系總體積，2.4×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
b. 使用96孔板測定的計算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
MCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1760×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
MCS（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=355.6×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
MCS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.711×ΔA
V反總：反應體系總體積，2.4×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。