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線粒體檸檬酸（MCA）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0240 | 售價(jià)（元） | 5760 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0240 |
線粒體檸檬酸（MCA）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測(cè)定意義：
MCA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和MCA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，（3）乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和MCA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。
測(cè)定原理：
MCA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng)，生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出MCA的含量。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0240-100T/96S |
Storage |
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酸性提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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堿性提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
6ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
2ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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標(biāo)準(zhǔn)液：液體 |
1ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)液：液體1ml×1支，10μmol/ml檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
自備儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、蒸餾水。
線粒體中檸檬酸提取：
稱0.05~0.1g樣品（建議稱0.1g樣本），加入0.5ml酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃離心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃離心10min，棄上清（取300μl該上清液和300μl堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì)CA含量測(cè)定）；沉淀即線粒體，向沉淀中加入0.5ml酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），取此溶液300μl和300μl堿性提取液中和，混勻，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到330nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一、二和三37℃預(yù)熱10min。
3、樣本測(cè)定：
空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要各做一個(gè)。
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試劑名稱(μl) |
空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
測(cè)定管 |
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試劑一 |
60 |
60 |
60 |
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蒸餾水 |
60 |
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標(biāo)準(zhǔn)液 |
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60 |
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樣本 |
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60 |
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試劑二 |
20 |
20 |
20 |
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試劑三 |
60 |
60 |
60 |
充分混勻，330nm立即測(cè)定初始吸光值A1和37℃孵育30min后的吸光值A2，ΔA=A2 –A1。
檸檬酸含量計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算
檸檬酸含量(μmol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(ΔA測(cè)定管－ΔA空白管)÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)管－ΔA空白管) ×V樣]÷（V樣÷Cpr）=10×(ΔA測(cè)定管－ΔA空白管)÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)管－ΔA空白管)÷Cpr
蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。
（2）按樣本鮮重計(jì)算
檸檬酸含量(μ mol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(ΔA測(cè)定管－ΔA空白管)÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)管－ΔA空白管) ×V樣]÷（W×V樣÷V樣總）=10×(ΔA測(cè)定管－ΔA空白管)÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)管－ΔA空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，10μmol/ml； V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積：0.06ml；V樣總：加入提取液體積：1ml；Cpr：樣品蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
注意：最低檢測(cè)限為10nmol/mg prot或1μmol/g鮮重。