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線粒體異檸檬酸脫氫酶檢測試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號 | SH0236 | 售價（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0236 |
線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）活性測定試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50管/48樣 |
測定意義：
ICDHm（EC 1.1.1.41）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸，同時將NAD+ 還原為NADH，是三羧酸循環(huán)的限速酶之一，其催化的反應(yīng)是細(xì)胞NADH主要來源之一。
測定原理：
ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH，導(dǎo)致340nm處光吸收上升。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0236-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
50ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
1ml |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1支 |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑七：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑七：粉劑×1支，-20℃保存; 臨用前加入3ml蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)菌或細(xì)胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿600g，4℃離心5min。
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的ICDHm（此步可選做）。
5、 在步驟④的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體ICDHm活性測定。
測定步驟：
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm處，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液于 37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。
3、 在1ml石英比色皿中依次加入60μl試劑七、80μl樣本和1ml工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和2min20s時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
ICDHm活性計算：
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=1145×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=231.3×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.463×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.14×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.08 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應(yīng)時間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。