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丙酮酸激酶（PK）檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/96S)
| 貨號(hào) | SH0223 | 售價(jià)（元） | 1080 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0223 |
丙酮酸激酶（PK）檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/96S) |
100管/96樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
PK（EC 2.7.1.40）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化糖酵解過程中的最后一步反應(yīng)，是糖酵解過程中的主要限速酶之一，也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一，因此測(cè)定PK活性具有重要意義。
測(cè)定原理：
PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下測(cè)定NADH下降速率，即可反映PK活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0223-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
10μl×2 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定
（1）試劑二的配制：臨用前取試劑二一瓶，加入9ml試劑一和1.06ml蒸餾水充分溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用。
（2）試劑三的配制：臨用前取試劑三一支，加入0.6ml蒸餾水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、10μl試劑三和180μl試劑二，混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
PK活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
1、血清（漿）中PK活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1608×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PK活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=1608×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=3.216×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
1、血清（漿）中PK活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3216×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PK活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=3216×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=6.432×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。