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過(guò)氧化氫酶（CAT）檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨比色法）（微量法100T/96S ）
| 貨號(hào) | SH0010 | 售價(jià)（元） | 216 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0010 |
過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨比色法） （微量法100T/96S ） |
100管/96樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
過(guò)氧化氫能氧化MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氫氧根的電子成鍵，分子間立即脫水縮合，得到穩(wěn)定的黃色復(fù)合物(H2MoO4·XH2O)n在405nm處有強(qiáng)烈吸收峰，其吸光值和過(guò)氧化氫濃度成線性關(guān)系。測(cè)定出體系剩余過(guò)氧化氫在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0010-100T/96S |
Storage |
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提取液：酸性提取液 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
15ml |
4℃避光 |
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試劑二：液體 |
25ml |
常溫 |
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試劑三：液體 |
60ml |
4℃ |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405 nm。
2、在EP管中加入下列試劑
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
空白管 |
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樣本 |
10 |
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試劑一 |
60 |
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混勻，25℃準(zhǔn)確反應(yīng)2 min |
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試劑二 |
200 |
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試劑三 |
530 |
530 |
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試劑二 |
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200 |
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提取液 |
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10 |
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試劑一 |
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60 |
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混勻，取200μl于96孔板立即測(cè)定A空白和A測(cè)定，ΔA=A空白-A測(cè)定。空白管只需做一管。 |
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CAT活性計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.09x + 0.0013 R2 = 1 x：體系中過(guò)氧化氫濃度變化值（μmol/ml）
y：吸光值差值ΔA
2、血清（漿）CAT活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(μmol /min/ml)= =(ΔA-0.0013)÷0.09×V反總÷V樣÷T
=444.44×(ΔA-0.0013)
3、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.09×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
=444.44×(ΔA-0.0013)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0013)÷0.09×V÷（W× V樣÷V樣總）÷T
=444.44×(ΔA-0.0013)÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.8 ml；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml。
注意事項(xiàng)
1、 預(yù)實(shí)驗(yàn)若發(fā)現(xiàn)酶活性過(guò)高（A測(cè)定＜0.1），可用提取液適當(dāng)稀釋樣品后測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
2、 若A空白＜A測(cè)定，一方面可能是酶活性過(guò)低，可將反應(yīng)時(shí)間2延長(zhǎng)到5min,另一方面可能樣本中雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，可將樣本稀釋5倍左右后測(cè)定，并在計(jì)算公式中代入實(shí)際反應(yīng)時(shí)間和乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。