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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒采用磁珠捕獲法提取外泌體，將兩親性基團(tuán)組合修飾在生物磁珠上，使得磁珠對(duì)脂質(zhì)包被的外泌體（EVs）具有獨(dú)特的親和力，能從尿液、唾液等樣本或細(xì)胞上清中提取外泌體，無(wú)需超速離心，可同時(shí)操作多個(gè)樣本，方便高效，可兼容下游NTA、WB、電鏡、蛋白組學(xué)檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品組成及儲(chǔ)存條件

外泌體提取試劑盒 (EVtrap) 組份如下：

有 效 期 1 年。

操作流程;

注：該試劑盒適用于多種樣本，如尿液、細(xì)胞上清、唾液及腦髓液等，100ul EVtrap magnetic beads對(duì)應(yīng)的可提取的樣本量見(jiàn)下表

樣本預(yù)處理

1、細(xì)胞上清

1）收集細(xì)胞上清5-20ml(收集時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)密度不低于1×106cfu/ml);

2）細(xì)胞上清離心（3000g、10 min），保留上清；

3）上清樣本使用0.22um濾膜過(guò)濾，備用。

2、尿液

1）采集中段晨尿約5-20ml,離心（3000g、10 min），保留上清；

2）上清濃縮至5ml(建議使用10K-100K的超濾管進(jìn)行濃縮）；

3）樣本濃縮后，使用0.22um濾膜過(guò)濾，備用。

3、唾液、腦脊液

1）收集唾液（腦脊液采用腰椎穿刺收集）1-3ml；

2）3000g、10 min離心，收集上清；

3）上清使用0.22um濾膜過(guò)濾，備用。

EV分離（以尿液樣本為例，其余樣本按對(duì)應(yīng)使用比例進(jìn)行分離）

1) 向10ml的尿液中加入1ml  Incubation  Buffer Ⅰ上下混勻（樣本量：Incubation Buffer Ⅰ

=10:1 ）;

2) 加入200ul的EVtrap magnetic beads 室溫下孵育0.5-1h，磁吸3 min 去上清；

3) 加入10ml Incubation Buffer II 上下顛倒混勻20-30次，磁吸3 min 去上清；

4) 加入5ml Washing Buffer 上下顛倒混勻20-30次，磁吸3 min 去上清，洗一次；

5) 加入1ml Washing Buffer 上下顛倒混勻20-30次，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管，磁吸3 min 去上清；

6) 加入200ul的Elution Buffer ，劇烈渦旋10 min；

7) 磁吸3 min 收集洗脫液，重復(fù)步驟6，將兩次洗脫液共400ul合并到一個(gè)離心管中，渦旋混勻后

再瞬離；

8) 凍干洗脫液，將凍干后樣品置于-80℃長(zhǎng)期保存，或用于下游檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)和免責(zé)說(shuō)明

1.將 EVtrap magnetic beads 儲(chǔ)存在4°C, 孵育液和洗滌液等儲(chǔ)存在室溫；

2.磁吸時(shí)請(qǐng)使用高磁磁力架，以保證磁珠的外泌體捕獲效果；

3.孵育后的操作步驟中，在進(jìn)行上下顛倒混勻時(shí)，動(dòng)作要輕柔，以避免與EVtrap magnetic beads捕獲的外泌體脫落；

4.本品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。  

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